干细胞CO2培养箱如果是隔水式培养箱可以采用甲酸熏蒸(甲醛与高锰酸钾反应生成甲酸)，然后再用75%酒精擦培养箱内壁即可，效果比较好。如果是气套式的培养箱用75%酒精直接擦培养箱内壁即可，或采用隔水式熏蒸，但熏蒸前要先将二氧化碳和温度探头封闭好，防止甲酸腐蚀。干细胞CO2培养箱是实验室*的仪器，但因其中需放置盛水容器而湿度较高，从而导致霉斑(经培养鉴定为丝状真菌)快速生长而影响工作，有碍观瞻和可能导致试验样本污染或院内感染扩散。虽使用了硫酸铜溶液、75%乙醇溶液或紫外线照射等多...

1、ATCC细胞冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。2、细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。3、材料37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器4、ATCC细胞步骤：(1)操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。(2)自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。(3)将新鲜培养基置于37...

冷冻ATCC细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。材料37℃恒温水，新鲜培养基，无菌吸管/离心管/培养瓶，液氮或干冰容器步骤：操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。将新鲜培养基置于37°C水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无...

zui常用的干细胞系为SP2/0和NS-1，均来自BALB/c小鼠骨髓瘤。一般在准备融合前的两周就应开始复苏骨髓瘤细胞，为确保该细胞对HAT的敏感性，每3～6个月应用8-氮杂鸟嘌呤筛选一次，以防止细胞的突变。骨髓瘤细胞悬液的制备方法如下：1．将刚复苏的瘤细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中，5%C02,37℃温箱孵育。每2～3天换液一次，3～5天传代一次，待细胞生长稳定后方可供细胞融合用。于融合前48～36小时，将骨髓细胞扩大培养（一般按一块96孔板的融合试验...

肿瘤细胞培养实验原理：是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老，死亡等生命现象。肿瘤细胞动物的选择：选择大约一半足孕时间的胚胎，10－13天龄胚胎含有zui大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。每组小鼠胚胎1个实验材料：每组的超净台中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml0.25%胰蛋...

1.绝大部分干细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可。吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足够消化细胞。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37℃消化。比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育。2.细胞如何算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，...

(1)干细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过;而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。(2)死活细胞在代谢上的差异：由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱。常见的细胞染料有：中性红(细胞器的专有染料)、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双醋酸酯(FDA)等。①中性红染色：常用染料之一，是细胞器的专有染料。利用干细胞膜的通透性差异，用来染原生...

1.如果您要做肿瘤细胞培养，记住实验中所用的试剂(分离液，洗涤液等)、器械等都要是无菌消毒的，并注意实验中的无菌操作。2.离心转速单位及时间：目前国外的文献报道基本上用g为单位，注意g和转速(rpm)的换算。3.离心温度：有的要求室温，有的要求4摄氏度。实验的操作要求尽可能熟练，连贯。4.在用Ficoll分离单个核肿瘤细胞(PBMC)时，通常含有少量的红细胞，对于一般的实验影响不大，如果实验要求较高，可采取裂解液(有的需要无菌)，并注意裂解时间控制，以免影响单个核细胞的活性。...

转化细胞通过高潮、射线、微波以及器械进行灭菌或除菌的方法均为物理灭菌方法。(1)紫外线消毒用于消毒空气、操作台面和一些不能用干热、湿热灭菌的培养器皿，如塑料培养皿、培养板等。这是常使用的消毒方法之一。(2)干热灭菌主要用于玻璃器皿的灭菌。将用于细胞培养的器皿放人干燥箱内，加热至160℃，保温90-120min。用于RNA提取实验的用品则需180℃，保温5-8h。(3)湿热灭菌此方法也称为高压蒸汽灭菌，是zui有效的一种灭菌方法。主要应用范围是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械...

神经细胞培养需要注意的操作方法神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质干细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象，但很难使之增值。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来，胶质细胞在培养中生长不稳定，不易自发转化，但对外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等诱发转化。1、从手术室无菌取脑髓灰质或白...

体外培养的细胞对培养基的基本要求营养成分1.氨基酸：所有ATCC细胞都需要12种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。2.单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收能力zui高，半乳糖zui低。体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。3.维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素b12都是培养基常有的成分。4.无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾...

贴壁细胞的传代培养实验操作方法实验原理细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本饱和，为使干细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养是一种将细胞种保存下去的方法，同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。实验材料CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75％秀精棉球、酒精灯、贴壁细胞株、*培养基(RPMLI640或DMEM)、0.25％胰蛋白酶、PBS液。...