RNAi基因敲除的优点及应用①.干细胞比用同源重组法更加简便，周期大大缩短。②.对于哺乳动物，如对于一些敲除后小鼠在胚胎时就会死亡的基因，可以在体外培养的细胞中利用RNAi技术研究它的功能。③.由于RNAi能特异的阻断基因的表达，它成为研究信号传导通路的良好工具。④.RNAi还被用来研究在发育过程中起作用的基因，如可用RNAi来阻断某些基因的表达，来研究他们是否在胚胎干细胞的增殖和分化过程中其起着关键作用。YAL011WBY4743,homozygousdiploid[303...

1.ATCC细胞清洗玻璃制品时，浸酸之后一定要用自来水冲洗10—15次。因为残存的洗液对细胞粘附有很大影响。清洗塑料制品时要用棉花或柔软纱布擦洗。千万不要用硬毛刷，否则损害塑料表面后细胞不易贴壁。Tip和Tube一定要用超声清洗处理后逐个清洗。如没有洗净会影响下一次使用的效果。2.干热灭菌时，应在白天使用烤箱，并不断观察，以免发生意外。当温度超过100℃时，不能再打开烤箱门。器皿烤完后，待温度降至100℃之下才能开烤箱门。金属器械和橡胶、塑料制品不能使用干热灭菌方法。.3.高...

ATCC细胞取材进行原代培养时常常需要将组织块消化解离形成细胞悬液，传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来，常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和edta溶液，有时也用胶原酶(collagenase)溶液。1.胰酶溶液：胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示，常见有1：125和1：250，即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。组织培养用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%浓度，配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡盐溶液(如前面的D-Hank"s)，因为这些物质会对...

1．肿瘤细胞在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃5％CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。2．用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1ml含4μgTNF的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔各加100μlRPMI...

1.1转化细胞细胞铺板：将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。1.2转染：16h后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA，每个样品设置6个复孔(1)配制DNA和转染试剂:96孔板转染质粒时每孔比例为pLenti：Firefly：Renilla：转染试剂=0.2μg：0.1μg：0.01μg：0.25μL(2)稀释好DNA及转染试剂，常温孵育5min(3)将稀释好的DNA分别和转染试剂混匀，常温孵育20min(4)每孔弃去15μL培养基，将15μLDNA转染混合液添加到每孔细胞样品中...

(一)转化细胞秋水仙素处理取骨髓前3～4小时先给小白鼠经腹腔注入0.1％的秋水仙素，注射剂量为4毫克／每公斤动物体重。(二)取骨髓经秋水仙素处理的小白鼠，可用损伤脊髓法处死，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出大腿骨和胫骨，用一小块纱布来回搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后将股骨剪碎投入小烧杯中，用2毫升1％柠檬酸钠溶液搅烂碎骨，使骨髓细胞游离出来。静止片刻，用吸管把悬浮液吸到离心管中，可重复冲洗一次。此时离心管中的细胞悬浮液可达4～5毫升。(三)低渗...

转化细胞凋亡大多为生理性死亡，是细胞衰老过程中各个细胞功能逐渐减退的结果。凋亡可见于许多生理和病理过程中，如各种更替性组织衰亡更新，也可见于照射及应用细胞抑制剂和数目性萎缩之时。肿瘤细胞也发生凋亡。这种坏死是活体内单个细胞或小团细胞的死亡，不是整个实质区内细胞同时死亡，死亡细胞的质膜(细胞膜和细胞器膜)不破裂，不引发死亡细胞的自溶也不引起急性炎症反应。凋亡的发生与基因调节有关。也有人称为程序性死亡(PCD)。转化细胞凋亡对人体的生理平衡和疾病的发生具有重要意义。电镜下凋亡的细...

ATCC细胞培养中使用血清的缺点血清成分复杂，虽含许多对细胞有利成分，也含有对细胞有害的成分，使血清有几个明显的缺点：1.对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。2.血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗...

干细胞交感神经系统在维持机体的正常功能和对环境的适应性反应中起着十分重要的作用。交感神经细胞培养特别有助于神经细胞发育和可塑性研究，利用体外培养系统可进行交感神经细胞的发生、死亡、形态和生化发育、递质表形的获得，以及靶组织与传入纤维的突触形成的研究。此外，通过体外培养系统可获得关于神经营养因子、激素，细胞因子等调节交感神经元发育的信息，了解传入纤维的输入以及与靶组织的的机制。1、材料和方法实验用出生当天的昆明种大鼠，在无菌条件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖镊在解剖显微...

干细胞CO2培养箱如果是隔水式培养箱可以采用甲酸熏蒸(甲醛与高锰酸钾反应生成甲酸)，然后再用75%酒精擦培养箱内壁即可，效果比较好。如果是气套式的培养箱用75%酒精直接擦培养箱内壁即可，或采用隔水式熏蒸，但熏蒸前要先将二氧化碳和温度探头封闭好，防止甲酸腐蚀。干细胞CO2培养箱是实验室*的仪器，但因其中需放置盛水容器而湿度较高，从而导致霉斑(经培养鉴定为丝状真菌)快速生长而影响工作，有碍观瞻和可能导致试验样本污染或院内感染扩散。虽使用了硫酸铜溶液、75%乙醇溶液或紫外线照射等多...

1、ATCC细胞冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。2、细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。3、材料37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器4、ATCC细胞步骤：(1)操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。(2)自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。(3)将新鲜培养基置于37...

冷冻ATCC细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。材料37℃恒温水，新鲜培养基，无菌吸管/离心管/培养瓶，液氮或干冰容器步骤：操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。将新鲜培养基置于37°C水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无...