(一)转化细胞秋水仙素处理取骨髓前3～4小时先给小白鼠经腹腔注入0.1％的秋水仙素，注射剂量为4毫克／每公斤动物体重。(二)取骨髓经秋水仙素处理的小白鼠，可用损伤脊髓法处死，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出大腿骨和胫骨，用一小块纱布来回搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后将股骨剪碎投入小烧杯中，用2毫升1％柠檬酸钠溶液搅烂碎骨，使骨髓细胞游离出来。静止片刻，用吸管把悬浮液吸到离心管中，可重复冲洗一次。此时离心管中的细胞悬浮液可达4～5毫升。(三)低渗...

转化细胞凋亡大多为生理性死亡，是细胞衰老过程中各个细胞功能逐渐减退的结果。凋亡可见于许多生理和病理过程中，如各种更替性组织衰亡更新，也可见于照射及应用细胞抑制剂和数目性萎缩之时。肿瘤细胞也发生凋亡。这种坏死是活体内单个细胞或小团细胞的死亡，不是整个实质区内细胞同时死亡，死亡细胞的质膜(细胞膜和细胞器膜)不破裂，不引发死亡细胞的自溶也不引起急性炎症反应。凋亡的发生与基因调节有关。也有人称为程序性死亡(PCD)。转化细胞凋亡对人体的生理平衡和疾病的发生具有重要意义。电镜下凋亡的细...

ATCC细胞培养中使用血清的缺点血清成分复杂，虽含许多对细胞有利成分，也含有对细胞有害的成分，使血清有几个明显的缺点：1.对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。2.血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗...

干细胞交感神经系统在维持机体的正常功能和对环境的适应性反应中起着十分重要的作用。交感神经细胞培养特别有助于神经细胞发育和可塑性研究，利用体外培养系统可进行交感神经细胞的发生、死亡、形态和生化发育、递质表形的获得，以及靶组织与传入纤维的突触形成的研究。此外，通过体外培养系统可获得关于神经营养因子、激素，细胞因子等调节交感神经元发育的信息，了解传入纤维的输入以及与靶组织的的机制。1、材料和方法实验用出生当天的昆明种大鼠，在无菌条件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖镊在解剖显微...

干细胞CO2培养箱如果是隔水式培养箱可以采用甲酸熏蒸(甲醛与高锰酸钾反应生成甲酸)，然后再用75%酒精擦培养箱内壁即可，效果比较好。如果是气套式的培养箱用75%酒精直接擦培养箱内壁即可，或采用隔水式熏蒸，但熏蒸前要先将二氧化碳和温度探头封闭好，防止甲酸腐蚀。干细胞CO2培养箱是实验室*的仪器，但因其中需放置盛水容器而湿度较高，从而导致霉斑(经培养鉴定为丝状真菌)快速生长而影响工作，有碍观瞻和可能导致试验样本污染或院内感染扩散。虽使用了硫酸铜溶液、75%乙醇溶液或紫外线照射等多...

1、ATCC细胞冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。2、细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。3、材料37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器4、ATCC细胞步骤：(1)操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。(2)自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。(3)将新鲜培养基置于37...

冷冻ATCC细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。材料37℃恒温水，新鲜培养基，无菌吸管/离心管/培养瓶，液氮或干冰容器步骤：操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。将新鲜培养基置于37°C水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无...

zui常用的干细胞系为SP2/0和NS-1，均来自BALB/c小鼠骨髓瘤。一般在准备融合前的两周就应开始复苏骨髓瘤细胞，为确保该细胞对HAT的敏感性，每3～6个月应用8-氮杂鸟嘌呤筛选一次，以防止细胞的突变。骨髓瘤细胞悬液的制备方法如下：1．将刚复苏的瘤细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中，5%C02,37℃温箱孵育。每2～3天换液一次，3～5天传代一次，待细胞生长稳定后方可供细胞融合用。于融合前48～36小时，将骨髓细胞扩大培养（一般按一块96孔板的融合试验...

肿瘤细胞培养实验原理：是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老，死亡等生命现象。肿瘤细胞动物的选择：选择大约一半足孕时间的胚胎，10－13天龄胚胎含有zui大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。每组小鼠胚胎1个实验材料：每组的超净台中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml0.25%胰蛋...

1.绝大部分干细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可。吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足够消化细胞。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37℃消化。比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育。2.细胞如何算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，...

(1)干细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过;而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。(2)死活细胞在代谢上的差异：由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱。常见的细胞染料有：中性红(细胞器的专有染料)、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双醋酸酯(FDA)等。①中性红染色：常用染料之一，是细胞器的专有染料。利用干细胞膜的通透性差异，用来染原生...

1.如果您要做肿瘤细胞培养，记住实验中所用的试剂(分离液，洗涤液等)、器械等都要是无菌消毒的，并注意实验中的无菌操作。2.离心转速单位及时间：目前国外的文献报道基本上用g为单位，注意g和转速(rpm)的换算。3.离心温度：有的要求室温，有的要求4摄氏度。实验的操作要求尽可能熟练，连贯。4.在用Ficoll分离单个核肿瘤细胞(PBMC)时，通常含有少量的红细胞，对于一般的实验影响不大，如果实验要求较高，可采取裂解液(有的需要无菌)，并注意裂解时间控制，以免影响单个核细胞的活性。...