转化细胞通过高潮、射线、微波以及器械进行灭菌或除菌的方法均为物理灭菌方法。(1)紫外线消毒用于消毒空气、操作台面和一些不能用干热、湿热灭菌的培养器皿，如塑料培养皿、培养板等。这是常使用的消毒方法之一。(2)干热灭菌主要用于玻璃器皿的灭菌。将用于细胞培养的器皿放人干燥箱内，加热至160℃，保温90-120min。用于RNA提取实验的用品则需180℃，保温5-8h。(3)湿热灭菌此方法也称为高压蒸汽灭菌，是zui有效的一种灭菌方法。主要应用范围是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械...

神经细胞培养需要注意的操作方法神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质干细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象，但很难使之增值。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来，胶质细胞在培养中生长不稳定，不易自发转化，但对外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等诱发转化。1、从手术室无菌取脑髓灰质或白...

体外培养的细胞对培养基的基本要求营养成分1.氨基酸：所有ATCC细胞都需要12种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。2.单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收能力zui高，半乳糖zui低。体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。3.维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素b12都是培养基常有的成分。4.无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾...

贴壁细胞的传代培养实验操作方法实验原理细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本饱和，为使干细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养是一种将细胞种保存下去的方法，同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。实验材料CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75％秀精棉球、酒精灯、贴壁细胞株、*培养基(RPMLI640或DMEM)、0.25％胰蛋白酶、PBS液。...

细胞毒理试验原理新的药物、化妆品、食品添加剂等在投放市场之前，都必须进行大量的肿瘤细胞毒性试验。细胞毒性主要包括杀死细胞、杀伤细胞、细胞新陈代谢发生改变等机理，表现为细胞凋亡、细胞坏死、细胞生长繁殖抑制等现象。细胞毒性试验中，除了观察测定上述现象外，还可以采集培养细胞在药物处理前后的代谢变化指标，如对处理细胞和对照细胞的DNA、RNA、蛋白质、多肽等特定种类和含量进行测定。用于抗肿瘤药物与肿瘤细胞株系的体外试验时，可以属于细胞药理试验。如果针对某些抗肿瘤药物是否对正常体细胞有...

ATCC细胞培养基操作技术分析1.准备一个培养瓶，加入适宜细胞培养的培养基，液体体积按照说明书的推荐配置，并平衡培养基的温度和pH（CO2）。2.在37℃水浴中或ATCC细胞的正常生长温度下将冻存管轻轻摇动。解冻要快，约2分钟或直到冰晶融化即可。3.从水浴中取出冻存管并用浸泡或喷洒70%乙醇的方式来消毒。进一步的操作均需在无菌操作台中严格无菌条件下进行。4.拧开冻存管的管帽并将内容物转移到一个含有9ml推荐培养基的无菌离心管中。通过温和离心（125×g10min）除去冷冻保护...

细胞分化的特点主要可以概括成三点①持久性:干细胞分化贯穿于生物体整个生命进程中,在胚胎期达到zui大程度②普遍性:生物界普遍存在,是生物个体发育的基础③稳定性和不可逆性:一般来说,分化了的细胞将一直保持分化后的状态,直到死亡正常情况下，细胞分化是稳定、不可逆的。一旦细胞受到某种刺激发生变化，开始向某一方向分化后，即使v引起变化的刺激不再存在，分化仍能进行，并可通过细胞分裂不断继续下去。但大量科学实验证明，在植物细胞中高度分化的植物细胞仍具有发育成完整植株的能力，即植物细胞的性...

流式干细胞实验中荧光染料如何选择（1）确定荧光染料本身所适合的流式干细胞仪，需要了解染料的激发波长和发射波长、仪器所配制的检测滤光片和激发光源。（2）了解荧光素的相对荧光强度：相对荧光强度反映的是荧光素-单抗结合物的亮度，其判断标准是染色指数。影响相对荧光强度的因素包括：不同仪器的激光及滤片组合不同，荧光素的相对荧光强度不同；抗体上荧光素分子的多少会影响相对的荧光强度。（3）选择原则：考虑抗原的密度【高密度表达的抗原可考虑选择几乎所有的荧光素；低密度表达的抗原需要可提供较高S...

如何识别细胞是属于哪种生物污染ATCC细胞培养中常见的生物污染类型有7种，分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染。他们在细胞培养中污染的特点如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。2、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤...

细胞有机物中主要由几大类分子所组成（一）糖类干细胞中的糖类既有单糖，也有多糖。细胞中的单糖是作为能源以及与糖有关的化合物的原料存在。重要的单糖为五碳糖（戊糖）和六碳糖（己糖），其中zui主要的五碳糖为核糖，zui重要的六碳糖为葡萄糖。葡萄糖不仅是能量代谢的关键单糖，而且是构成多糖的主要单体。多糖在细胞结构成分中占有主要的地位。细胞中的多糖基本上可分为两类：一类是营养储备多糖；另一类是结构多糖。作为食物储备的多糖主要有两种，在植物细胞中为淀粉（starch），在动物细胞中为糖元...

检测干细胞四唑盐比色法试验原理此法的原理是：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，而干细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，用酶联免疫检测，以在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反应活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。●0.25%胰蛋白酶消化细胞使其成为单细胞，用含0.1%胎牛血清的RPMI培养基配成1x10^9个/L的但细胞悬液，将细胞接种于96孔培养板中，每孔...

肿瘤细胞培养的冻存和注意事项1.肿瘤细胞应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。2.在无菌台内将*培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养3.将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以*培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄...