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转化细胞常用纯化方法
转化细胞人工纯化是利用人为手段造成对某一细胞生长有利的环境条件,抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的。1、细胞时间差酶消化法:酶消化法是比较常用的纯化方法,不仅对贴壁细胞可行,能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同,是两者分开,达到纯化的目的;另外对贴壁细胞与半贴壁细胞及黏附细胞间的分离纯化也是十分有效的。两者在胰蛋白酶的作用下,由于成纤维细胞先脱壁,而上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁,特别是在原代细胞初次传代和早期传代中两种差别尤为明显,故可采用多次差别消化方...
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微生物竟可操控肿瘤细胞分子控制宿主
日前,来自杜克大学的肿瘤细胞研究发现,肠道微生物可以通过操控动物细胞的分子机制来控制宿主,激活保持机体健康或引发疾病的基因表达模式。据悉,这项研究在斑马鱼和小鼠细胞中进行,其研究结果对人类的炎性肠病具有重大意义,例如克罗恩病和溃疡性结肠炎。研究结果发表在GenomeResearch杂志上。这项研究的资深作者、杜克大学医学院分子遗传学和微生物学助理教授JohnF.Rawls博士说:“研究结果说明,我们基因组中古老的部分以及与微生物古老的互作关系都与现代人类疾病相关。”科学家们近...
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ATCC细胞建立的要求
ATCC细胞的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞,视具体情况而定,无统一规定。对于用作原代培养的细胞只要供体均一,取材部位及组织种类等条件稳定即可,如用做长期培养,特别是反复传代的细胞,常需做如下说明:1、组织来源:细胞供体所属物种,来自人体或者动物;个体性别、年龄;取材的器官或组织。2、细胞生物学检测:了解细胞一般和特殊的生物学性状,如细胞一般形态,特异结构,细胞生长曲线和分裂指数倍增时间,接种率等。如为肿瘤细胞,为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性,须做软琼脂培养,异体接种致瘤...
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干细胞培养瓶的选择
干细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536孔等;根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。(1)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择不同形状的培养板有不同用途。培养细胞,通常是选用平底的,这样便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致。因此做MTT等实验时,无论是贴壁和悬浮细胞,一般选用平底板。测吸光值一定要使...
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转化细胞内能量稳态调节机制
转化细胞在973计划的支持下,“神经分化各阶段细胞命运决定的调控网络研究及其转化应用”项目取得重要进展,发现了细胞感受外界环境变化并做出反应的关键分子及其作用机制。生物体总是处于不断变化的细胞内外环境中,譬如温度、细胞内外酸碱度及渗透压等。所有生物体都需要感受这些不断变化的内外界环境并做出相应的反应,以维持细胞正常的生理功能。但是,细胞如何对环境变化做出反应并不清楚。同济大学章小清教授研究团队发现了可以感受温度、细胞外酸碱度及渗透压变化的转录因子Smad5,当细胞外环境发生变...
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干细胞发现乳腺癌转移抑制基因
干细胞一旦“上皮—间质转化"(EMT),就要比未发生EMT的癌细胞活动能力更强,容易发生脑、肝、肺、骨等转移,而且,发生了EMT后的恶性肿瘤“种子"会反过来影响其生长的“土壤",让“土壤"培育出更多坏“种子"。很多人谈癌色变,一方面是因为癌症的杀伤力大,另一方面,也是因为至今在肿瘤领域仍存在许多未解之谜。比如说,为何同病不同命——有人得了癌症,治疗后一直没有复发,成了“抗癌明星";但相当一部分人却不幸死于肿瘤转移。乳腺肿瘤中心教授及其研究团队所做的工作之一,就是希望解开乳腺癌...
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干细胞技术构建出血液与大脑的屏障模型
近日出版的《细胞·干细胞》杂志上的这一突破性研究,能帮助科学家认识艾伦—赫恩登—达得利综合征(AHDS)、阿尔茨海默病和亨廷顿氏病等神经性疾病的关键机理,并找到治愈它们的良方。美国威斯康星麦迪逊大学近日发布公告称,该校科学家利用诱导多能干细胞技术,在实验室构建出血液与大脑的屏障模型。威斯康星麦迪逊大学化学和生物工程教授艾瑞克·舒斯塔带领其团队,利用AHDS患者的细胞培育出诱导多能干细胞,不仅重建了AHDS疾病,更在实验室构建出血液与大脑屏障模型。“如果我们一直停留在神经细胞的...
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控制衰老的干细胞
成体干细胞是成熟机体中尚未分化的细胞,拥有有限的分化潜力,可以修补特定类型的组织。下丘脑是大脑深处丘脑下方、脑干上方的部位,调节着生长、代谢、繁殖等多项重要生理活动。研究人员发现,随着实验鼠年龄增长,下丘脑中的成体神经干细胞数量会逐渐减少。实验鼠年龄达到10个月、衰老迹象尚未出现时,成体神经干细胞就开始减少。到两岁,也就是鼠的高龄阶段,这种细胞差不多*消失。实验表明,下丘脑干细胞受到干扰时,中年实验鼠会加速衰老、提早死亡。正常老年实验鼠或下丘脑干细胞受损的中年实验鼠接受干细胞...
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ATCC细胞基因位置对生物进化影响更大
自然界的生物,不同ATCC细胞个体的外形特征有很大差别,比如身高、眼睛颜色等,即使同一群体这些特征也有明显差别。当前能解释生物外形特征差异的机制,只有少数突变、自然选择、机会等。研究人员希望通过检测基因组的变异部分和这些变异如何影响外形特征的表达,解释为什么不同的外形特征,基因变异程度不同即发生变异的基因数量不同。在生物体改变外形特征、不断进化的过程中,如果某些特征被表达的可能性越高,控制这些特征的基因就更容易发生变异,而此特征也就更有可能发生变化。发表在出版的《科学》杂志上...
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ATCC细胞购买后的操作准则
如果ATCC细胞是单层贴壁生长:1.无菌操作,取出大约5至10ml的运输培养基。运输培养基可以保存在4℃备用。2.将培养瓶放在产品说明书中推荐的温度和CO2浓度下培养(大多数细胞系为37℃与5%CO2)直到细胞可以传代培养。如果ATCC细胞不贴壁或是悬浮状态生长:1.在无菌条件下,将培养瓶的全部内容物转移到离心管中。2.在125×g转速下离心5~10min。3.取出大约10ml运输培养基的上清液,并重悬细胞。将取出的运输培养基储存在4℃备用。4.无菌条件下,转移悬浮细胞到25...
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ATCC细胞如何进行染色
实验原理1.ATCC细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。2.由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同,在pH值不同的溶液中,蛋白质分子所带的净电荷多少不同。如在生理条件下,整个蛋白质所带负电荷多,则为酸性蛋白质;带...
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干细胞培养新三维结构材料
德国卡尔斯鲁厄理工学院(KIT)的研究人员近日成功在一种新的三维结构材料中培养出干细胞,从而实现细胞粘附及细胞形状的三维控制。研究报告发表在出版的《先进材料》上。目前,三维环境中的细胞培养所采用材料多是由琼脂糖、胶原纤维或基质胶制成,由此模拟出的真实三维环境也让细胞培养实验变得更加切实可行。不过所有这些材料都有一个特性:所含孔径混杂,大小不一。由此带来的一个后果是:很难从结构和生化角度对实验结果进行表征。在这项研究中,研究人员采用了一种具有疏蛋白(protein-repell...
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