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简单实用的ATCC细胞冻存方法
ATCC细胞冻存液:一般用10%DMSO(推荐用sigema原装的,质量好不用预消毒)+10%血清的*培养基,如果细胞珍贵的话用10%DMSO+90%全血清。降温方法:用zui少两厘米厚的医用棉纱将冻存管紧紧包裹,扎紧,直接放入-70度冰箱,隔夜取出冻存管直接放液氮冻存。复苏效果对比:细胞冻存2周后复苏,本方法冻存的细胞与使用程序性降温仪冻存的细胞复苏效果相差不大,但明显比传统4度、-20度、-70度的方法要好,传统的冻存方法不但费时费力,而且各时间段的放置时间并无严格统一,...
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皮肤细胞将转化为转化细胞并保持活力
如今科学家们能够利用多种方法将一种转化细胞类型转化成为其它细胞类型,其中所涉及的一种技术就是将成熟细胞转化成为多能性干细胞,随后利用化学混合制剂诱导多能干细胞使其分化成为所想要的细胞类型。在过去几年里,科学家们开始开发一种折中的方法,这种方法能够让皮肤细胞“时光倒流”,以便皮肤细胞失去成熟细胞的特性,并且变得和干细胞一样。研究者JaleesRehman指出,这种方法并不能让细胞*恢复至多能干细胞的状态,但却可以使其进入到一种中间前体细胞的状态,祖细胞能够被大量培养用于再生医学...
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ATCC细胞固定后之抗原修复
ATCC细胞大多数甲醛固定的组织在开始染色之前都需要先修复抗原,这是由于在固定过程中产生了亚甲基桥使蛋白之间交联屏蔽了抗原位点。两种抗原修复方法为热修复法(称之为热诱导抗原表位修复或HIER)和酶解法。这些修复方法原理都是将亚甲基桥打断,使抗原表位暴露出来,以便于抗体结合。有的抗原适合酶解修复,有的抗原适合热修复。酶解修复有时会损坏组织的形态结构,因此需要摸索酶浓度和作用时间。热修复法热抗原修复方法有高压蒸汽法、微波法或蒸煮锅法。或者将玻片置于修复溶液中60°C水浴过夜。除非...
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ATCC细胞老化的表现及预防方式
ATCC细胞老化的原因和预防1)接种密度的影响:部分干细胞具有一定的分泌性能,能够分泌一些对细胞有支持能力的因子类物质;所以必须维持一定的接种密度,否则会导致细胞增殖减慢,zui后出现老化;2)消化过度:消化细胞时会对细胞的表面蛋白有较强的损伤,所以消化的时间不能过长,使用合适浓度和pH值的消化酶,否则会导致细胞老化和分化;3)合适的密度的时候就要传代:细胞如果过密,接触抑制作用会导致细胞的活力减弱并影响增殖导致老化;4)使用合适的血清和培养基:不同的干细胞对培养基特别是血清...
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介绍肿瘤细胞四阶段
肿瘤细胞的生命是一个持续更新、持续从头开始的过程。从它的母细胞分裂开始,到它的子细胞形成或细胞自身死亡结束。而细胞周期就是指从一次细胞分裂形成子细胞开始,到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程。细胞在这种前期、生长、DNA复制和分裂等阶段间循环。一直以来,区分细胞这4个阶段并非易事,因为要同时对来自许多不同报告蛋白(作为报告基因的蛋白)的信号进行成像,在技术上是非常困难的。为了克服这一限制,美国斯坦福大学研究人员迈克尔·林及其同事,此次开发了一种名为mMaroon1的荧光...
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分析恶性生殖干细胞肿瘤分子开关
恶性生殖干细胞肿瘤是一种各个年龄段男女都可能罹患的癌症,如睾丸癌、卵巢癌皆属于此列。虽然目前的化疗疗法可在一定程度上治疗该类疾病,但化疗产生的副作用也很严重,会损害患者的听力,造成肾脏、肺叶以及骨髓损伤。zui近,英国剑桥大学研究人员称,一种名为LIN28的蛋白在恶性生殖细胞肿瘤的形成过程中起着重要作用,是促发癌症的关键“开关”。这一发现对于开发新的恶性生殖细胞肿瘤治疗方法具有重要意义。在该项研究中,剑桥大学研究人员发现,所有的恶性生殖细胞肿瘤中都含有大量的LIN28蛋白,该...
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ATCC细胞毒试验的几种方法
ATCC细胞毒试验实在组织培养中研究淋巴细胞、抗体或抗体依赖性淋巴细胞杀伤靶细胞的一种技术,也是在体外研究特异性细胞免疫比较可靠和灵敏的方法,目前微量细胞毒试验是应用zui广的一种方法.(一)淋巴细胞对肿瘤细胞的细胞毒试验方法:1)肿瘤细胞培养物制成悬液,并稀释至需要的细胞浓度.2)于微量试验班的小孔内分别接种0.2ml肿瘤细胞(内含5×102)个细胞,37℃培育24h.3)细胞贴壁后,轻轻轻去培养基,加1mlPBS洗涤,轻去洗涤液及未贴壁细胞.4)向小孔分别加入0.2ml不...
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转化细胞可测量时间的大脑神经元
转化细胞这项研究中,研究者让猴子只依赖内部感官来感知时间的流逝,这项实验的设计可以消除所有可以作为外部“时钟”的线索。研究者训练猴子,让其在没有任何外部提示或者奖励的情况下,眼睛以固定的时间间隔进行移动。研究者发现尽管缺少感觉信息,猴子依然可以准确持续地进行这种行为,猴子这种持续性行为的存在或许因为大脑中特殊区域-侧顶叶(LIP)的活性而致。更有意思的是,研究人员发现,猴子在任务期间大脑LIP的活性与处于外部有提示或者奖励的情况下大脑中的LIP的水平不同。近日,来自明尼苏达州...
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转化细胞常用纯化方法
转化细胞人工纯化是利用人为手段造成对某一细胞生长有利的环境条件,抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的。1、细胞时间差酶消化法:酶消化法是比较常用的纯化方法,不仅对贴壁细胞可行,能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同,是两者分开,达到纯化的目的;另外对贴壁细胞与半贴壁细胞及黏附细胞间的分离纯化也是十分有效的。两者在胰蛋白酶的作用下,由于成纤维细胞先脱壁,而上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁,特别是在原代细胞初次传代和早期传代中两种差别尤为明显,故可采用多次差别消化方...
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微生物竟可操控肿瘤细胞分子控制宿主
日前,来自杜克大学的肿瘤细胞研究发现,肠道微生物可以通过操控动物细胞的分子机制来控制宿主,激活保持机体健康或引发疾病的基因表达模式。据悉,这项研究在斑马鱼和小鼠细胞中进行,其研究结果对人类的炎性肠病具有重大意义,例如克罗恩病和溃疡性结肠炎。研究结果发表在GenomeResearch杂志上。这项研究的资深作者、杜克大学医学院分子遗传学和微生物学助理教授JohnF.Rawls博士说:“研究结果说明,我们基因组中古老的部分以及与微生物古老的互作关系都与现代人类疾病相关。”科学家们近...
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ATCC细胞建立的要求
ATCC细胞的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞,视具体情况而定,无统一规定。对于用作原代培养的细胞只要供体均一,取材部位及组织种类等条件稳定即可,如用做长期培养,特别是反复传代的细胞,常需做如下说明:1、组织来源:细胞供体所属物种,来自人体或者动物;个体性别、年龄;取材的器官或组织。2、细胞生物学检测:了解细胞一般和特殊的生物学性状,如细胞一般形态,特异结构,细胞生长曲线和分裂指数倍增时间,接种率等。如为肿瘤细胞,为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性,须做软琼脂培养,异体接种致瘤...
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干细胞培养瓶的选择
干细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536孔等;根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。(1)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择不同形状的培养板有不同用途。培养细胞,通常是选用平底的,这样便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致。因此做MTT等实验时,无论是贴壁和悬浮细胞,一般选用平底板。测吸光值一定要使...
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