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更新时间:2017-01-09
厂商性质:经销商
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人急性早幼粒细胞白血病细胞;HL-60图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人急性早幼粒细胞白血病细胞;HL-60图片
形态特性 髓样
生长特性 悬浮
特征特性 该细胞含有myc+致癌基因,受体表达:补体Fc;致瘤性:阳性。
培养条件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 20%FBS
传代方法 每2-3天换液一次,细胞接种密度为1E+05/ml,不要超过1E+06/ml。
传代情况 完成目录中显示细胞污染废弃
冻存条件
支原体检测
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
RNA Tris Base( 三羟甲基氨基甲烷 )100g
DNA 电泳分子量标准 (3)pBR322/BstN I50 次
AMV 逆转录酶200U
微量 RNA 定量试剂盒1mL
120905-200人淋巴细胞分离液 1.077(FICOLL 配置 ) 200mL
填入法 DNA 末端标记试剂盒 C5次
L- 苯丙氨酸10g
SDS-PAGE 分离胶配胶液500mL
3120-0.1微量 RNA 助沉剂0.1mL
130933-50FTA 血片 DNAout50 次
预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (29:1)100g
ABTS 溶液,7mM 50mL
KM71 酵母菌种1mL
12-212DH10Bac 菌种1mL
硫酸铁100g
dNTP 溶液,100mM 0.5mL
真菌种属鉴定 PCR Mix 1100 次
超氧化物歧化酶,人10ku人血清白蛋白 V500mg
硝酸纤维素膜,13×20cm1张
70908-100DNA PAGE 胶回收试剂盒100 次
核糖核酸酶 HII250U
1000 μL RNase-free 蓝吸头 ( 盒装已灭菌 )100 支
自诱导培养基 (lac 启动子 )200mL
CAS9003-39-8聚乙烯吡咯烷酮 K360100g
12-254Stb14 菌种1mL
M13 噬菌体单链基因组 DNAout50 次
一管式拭子 DNAout20 次
28重组蛋白(病毒)--
脂质氧化 (MDA) 检测试剂盒100 次
Hoechst33258 干粉10mg
叠氮25g
刀豆球蛋白 A Ⅲ50mg
CAS57-33-0戊巴比妥5g
17- μL RNase-free 蓝吸头 ( 盒装已灭菌 )100 支
大提柱式藻类 RNAout5次
DTT,蛋白5g
131032-100人基因组 DNA,女性100μg
23-0110-100Camptothecin( 喜树碱 )100μL
120630-25Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM25μL
JM107 菌种1mL
131236-250牛血清白蛋白封堵液250mL
Rosetta-gami B(DE3) 菌种1mL
非冻型拭子病毒保存液100mL
CAS1523-11-1#NAME?5g
60702-100RNase-free SDS 溶液 ,10%100mL
石蜡包埋组织 RNAout30 次
琼脂糖100g